蛋白桑: 桑叶抑菌作用及其活性物质提取分离研究

           

摘要 本课题主要对桑叶提取物的抑菌活性进行了研究,包括抑菌谱及最低抑菌浓度的确定,优化抑菌活性物质的提取工艺,探讨了抑菌活性物质的稳定性并进一步对抑菌活性 物质进行分离纯化和成分粗测。最后对桑叶提取物作了一些应用研究。 将桑叶用水和70%乙醇分别提取后,用滤纸片法和平板计数法进行抑菌实验,得到 抗菌谱。采用线性回归法快速准确的得出它们对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌 浓度。乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的MIC:0.43%,对大肠杆菌的MIC:0.055%;桑 叶水提取物对金黄色葡萄球菌的MIC:O.86%;对大肠杆菌的MIC:1.54%。可见桑叶 乙醇提取物对两种代表性细菌的抑菌效果优于水提取物。 采用单因素实验确定桑叶抑菌活性物质提取最佳条件为:乙醇浓度70%(V/V)、 提取温度70。C、提取时间4h、液料比(W/V)1:30。采用正交实验,得出最佳工艺条 件为乙醇浓度70%,提取温度70。C,提取时间6h,液料比l:40。此条件下,桑叶提 取物对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为8.81mm。 对桑叶提取物抑菌活性做了稳定性测试,结果表明桑叶提取物的抑菌活性具有较好 的热稳定性,对紫外光照射稳定。对菌体的抑制能力随pH值的升高而有所下降,其中 酸性条件下抑菌活性较强,在pH6.7之间,缓冲液对提取物的抑菌活性没有影响,并且 提取物的抑菌效果好。 对活性物质进一步分析,首先将桑叶提取物分为石油醚部、二氯甲烷部、乙酸乙酯 部、正丁醇部和水部等不同极性溶剂萃取物,经抑菌活性比较,确定乙酸乙酯部的抑菌 活性最强,正丁醇部次之。乙酸乙酯部经薄层层析,展开后,有多个斑点,用1%的A1C13 显色,多个点显示黄色,紫外灯光下显黄绿色和棕色。推断抑菌组分属于黄酮类化合物。 乙酸乙酯部分上聚酰胺和硅胶柱分离,得到抑菌效果最好的组分,薄层层析,发现 三个清晰的斑点,Rf值分别O.20,O.27,0.72。桑黄素的Rf值为0.27,通过HPLC验证桑 黄素是桑叶抑菌有效成分之一。 把桑叶提取物加入到化妆品中作测试,结果表明桑叶提取物具有很好的防腐、美白、 保湿效果,可以在化妆品中广泛应用。 关键词:桑叶:防腐剂;提取;抑菌活性;分离;化妆品;美白;保湿;

第一章综述第一章综述 前言 化妆品的使用具有非常久远的历史,并且伴随着人类自身的存在和发展而流传至今 考古学家们相信,人类自旧石器时代即己开始使用化妆品,这一时期大约自5万年前开始。人类早期使用的化妆品大多数都是天然矿物质,这些物质本身就有抗菌能力, 不存在防腐问题。随着科学技术的发展,产生了现代化妆品工业,化妆品走进了千家万 户,其原料也不再局限于天然物质。为了使化妆品在保质期内及在消费者使用期内不发 生微生物污染,各种化妆品必然要添加一定的防腐剂。 调查表明,尽管大多数到消费者手中的化妆品处于良好的微生物状态,但它们不能 经受在使用过程中带入产品中的大量微生物。可是在日常生活中,无论是恬静的家居, 还是各种社交聚会;无论是穿越大街小巷,还是沐浴在大自然中,人们总是被各种各样 的微生物包围着,其中很多是致腐性微生物,正是这些微生物造成了对化妆品的污染。 污染性微生物通过各种各样的水解酶使化妆品的原料产生代谢作用,从而引起气味、色 泽、粘度等向不利的方向转化。尽管大多数是致腐性微生物,也有一些会侵入人的肌肤 并表现为对健康的危害,被污染的浴液引起皮肤感染,防腐不良的眼部化妆品会引起眼 部疾患。 哪里有水存在,哪里就有生命,不考虑温度、pH值或其他环境因素,只要水 以液体形式存在,就会有微生物生活在其中。因此,防腐的核心就是选择适当的防腐剂 加入到化妆品中,有效地抑制化妆品中的微生物的生长和繁衍。 

1引言 造成化妆品不稳定的一个主要因素就是微生物,由于化妆品中的原料、添加剂中含 有大量的营养物质和水分,其中大部分是微生物生长、繁殖所必需的碳源、氮源和水, 在环境适宜的情况下,微生物在化妆品中将会大量生长繁殖,吸收、分解和破坏化妆品 中的有效成分。受到微生物作用的化妆品就会发生变质、发霉和腐败。化妆品的变质不 仅会导致色、香、味发生变化,质量下降,而且变质时分解的组织会对皮肤产生刺激作 用,繁殖的病原菌还会引起人体疾病。 

2化妆品的变质和防腐剂的研究现状 2.1防腐剂的抑菌机理,所谓防腐NE4’51是用微量的剂量加入成品后,对产品的各项指标均无不利影响,对 人及环境符合卫生标准,而能使产品在规定时间内保持不受霉变的物品。合格的防腐 剂,它首先是有足够的杀灭和抑制各类微生物的能力;其次有极高的安全系数,要求 无毒,无刺激,无皮肤过敏;再其次添加量必须是微量(化妆品中一般添加量是万分 江南大学硕士学位论文 之几)有杀菌力的东西成千上万,但同时具备以上3个条件成为化妆品专用防腐剂的 目前经常使用的仅十多种。现在消费者关心的就是无毒,无刺激,无皮肤过敏问题。 防腐剂对微生物的作用在于它能选择性地作用于微生物新陈代谢的某个环节,使 其生长受到抑制或致死,而对人体细胞无害。 

2.1.1抑制微生物细胞壁的形成 防腐剂抑制微生物细胞壁的形成是通过阻碍形成细胞壁的物质的合成来实现,如有 的防腐剂可抑制构成细胞壁的重要组分肽聚糖的合成,有的可阻碍细胞壁中甲壳质的合 成,有的则破坏细胞壁的结构,使细胞破裂或失去其保护作用,从而抑制微生物生长以 至死亡。

 2.1.2影响细胞膜的功能 防腐剂破坏细胞膜,可使细胞呼吸窒息和新陈代谢紊乱,损伤的细胞膜导致细胞物 质的泄漏而使微生物致死。如苯甲醇、苯甲酸、水杨酸等物质,通过损害了正常细胞的 蛋白质结构而使细菌死亡。

 2.1.3抑制蛋白质合成和致使蛋白质改性 防腐剂在透过细胞膜后与细胞内的酶或蛋白质发生作用,通过干扰蛋白质的合成或 使之变性,致使细菌死亡。如链霉素等由于对细菌具有干扰其蛋白质合成作用,成为一 种优良的抗生素。如硼酸、山梨酸等的作用,可使细胞内蛋白质变性,醇类、醛类易使 蛋白质凝固沉淀,而具有抗菌的作用。 

2.2化妆品中微生物的检测 微生物无论在未使用过的还是正在使用的化妆品中都存在。化妆品中分离出的常见 微生物菌群有细菌(包括革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌)如大肠埃希氏菌、假单胞菌,霉 菌如黑曲霉、青霉,酵母菌如假丝酵母、白色念珠菌等睁10l。其中有些菌群对人体无害, 而有些菌群如金黄色葡萄球菌(Shaphylococcusaureus)、绿脓杆菌(Pscudomonasaeruginosa) 等,对人体有极大的危害。 目前各国对医药品和化妆品的微生物学评定尚无统一的标准。一般说来,对婴儿用 品及眼用医药品、化妆品的规定标准较严。我国化妆品卫生标准GB7916—87规定,化妆 品菌落总数不得超过1000cfu/mL(g),眼部、121腔黏膜用品及婴儿、儿童用品不得超过 500cfu/mL(g),霉菌和酵母菌不得超过lOOcfu/mL(g),绿脓杆菌(Staphylococcus aureus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus锄r饥s)等有害菌群不得检出。 

2.3影响化妆品防腐活性的因素 防腐剂的作用效果与很多因素有关,在一种体系中具有高效防腐作用的防腐剂在另 一种体系中也许毫无效果。因为在某个配方体系中,会有多个因素使防腐剂失效。下面 第一章综述列举了影响防腐剂效果的几种主要因素‘2—11: (1)pH的影响 pH值的改变影响有机酸防腐剂的离解从而影响防腐剂的活性,pH的改变也会改 变防腐剂的活性。另外,悬浮液中不溶解固体pH的影响也会使那些对pH敏感的防 腐剂失效。 (2)固体粒子及凝胶的影响 一些化妆品含有高岭土、硅酸铝镁等粉质粒子,能够吸附防腐剂,造成防腐剂的 活性损失。但有的吸附剂在吸附防腐剂的同时也吸附其中的细菌,使其置于高浓度防 腐剂中强化其抑菌效果。防腐剂与水溶性高分子凝胶的结合,使配方中游离的防 腐剂浓度降低从而降低其效能。 (3)非离子表面活性剂加溶作用的影响陋 化妆品中的各类表面活性剂,尤其是非离子表面活性剂与防腐剂之间会形成加溶 .络合作用而影响到防腐剂的活性。油溶性的非离子表面活性剂(HLB=3—61对防腐剂的 失活作用要比HLB值高的水溶性非离子表面活性剂大。 由于体系中游离防腐剂浓度 变小而降低了防腐剂的活性,因此在一些非离子表面活性剂体系中,要保持原有的防 腐作用,应适当增加防腐剂的用量。 (4)防腐剂变质的影响 有些因素会影响防腐剂自身的变质从而降低防腐效果。如光照,加热等引起防 腐剂分解,化学和生化反应引起的失效,或者辐射消毒灭菌过程中引起损失等等。 (5)其他作用 此外,防腐剂在油水两相中的分配,包装容器及香精、螯合剂的存在,都会不同程 度地影响防腐剂的活性。 

2.4防腐剂所需要具备的条件 用量少、抗菌范围广的单一防腐剂是不存在的。但是,设想一个“理想”的防腐剂 标准对于我们研究开发一个高效广谱的防腐体系具有重要意义。我们认为,一个 好的防腐剂至少应该满足下面的条件: (1)具有良好的抑菌性能,不仅抗细菌,而且抗真菌(霉菌和酵母菌)。 (2)用量很少即可取得较好的抑菌效果。 (3)在广泛的pH范围内有效。 (4)安全性好,没有毒性和刺激性。 (5)化学惰性,不与配方中其他成分及包装材料反应。 (6)具有合适的油水相分配系数,使其在产品水相中达到有效的防腐浓度。 (7)与大多数原料相容,不改变最终产品的颜色和香味。(8)使用成本低,容易获得。 

 2.5防腐剂的有效性评价标准 化妆品防腐体系功效性评价(PET)方法〔21五3】,防腐剂体系有效性的评价,不同的国 家使用了几种不同的PET方法,包括美国药典(USP)法、英国药典(BP)法和欧洲药典 (EP)法。1995年时,为协调欧洲国家的测试方法,BP经修订与EP一致。美国化妆、盥洗 和香精联合会(CTFA)也有自己的测试方法(简称CTFA法阱.26j)。USP法和CTFA法都 是标准方法。另外还有一些快速测试程序,如线性回归法、 加速防腐作用测试法和假 定激发法。这几种方法的实验过程都很相似,但样品分析所需的时间和有效性判断的标 准不同。这些不同之处可导致测试结果的变化以及某产品是否能通过激发测试。 

2.5.1USP法【2728】 (1)激发实验用微生物 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、黑曲霉菌。 (2)微生物接种浓度 微生物接种浓度为1.0x105_1.0x106efu/mL(曲 (3)取样测定的时间程序 取样测定的时间程序为接种后的0,7,14,21和28天取样测定评估。 (4)有效性的标准 在第14天,活细菌浓度减少99.9%以上; 前14天酵母菌和霉菌浓度维持或低于 原接种浓度;在28天试验期,每次取样浓度保持或低于要求的浓度。 (5)试验手续 l,实验用接种物(菌液)的制备 应选用纯菌种作为实验用菌株。实验前,应以新鲜斜面培养物分别接种在蛋白胨 琼脂或普通肉汤琼脂斜面培养基上,于30—370C培养24小时;用生理盐水将培养物稀 释到每毫升含菌数约lxl08个。各实验用的酵母菌和霉菌,应以新鲜斜面培养物分别 接种在沙氏琼脂或改良马丁琼脂培养基斜面上。黑曲霉在20.280C培养7天,用生理 盐水稀释到每毫升约lxl08的孢子的菌悬浮液。 2,培养基 应选择最适于各实验菌株生长的培养基。如对细菌一般可用蛋白胨琼脂培养 基.普通肉汤培养基,对酵母和霉菌可用沙氏琼脂培养基、改良马丁培养基、察氏琼 脂培养基。也可选用其他适于这些菌生长繁殖良好的培养基。 3,实验操作 用合适大小带塞的消毒的试管取5份试样,每份20mL;按O.1ml接种物/20mL 试样相同的比例将每份试样接种。使接种后试液的微生物浓度为lxlos-lxl06efu/mL(g) 试液。测定接种后每份试样的微生物数,计算出每毫升微生物的个数,作为试样微生 物起始浓度。接种后试样在20.28。C进行培养(或在指定的温度下培养)。在接种后7、 14、2l、28天后,用平板菌落计数法测定试样的活的生物数,记录其外观的变化,以 第一章综述各式样开始时微生物的浓度作为理论浓度,计算每种微生物变化的百分率。根据上诉 标准评估防腐剂的有效性。 

3.1植物抑菌活性物质的种类与性质 从植物中开发天然防腐剂已成为当前研究的热点M.大量研究发现。521多种天然 物质如大蒜、芦荟、茶叶等的提取物具有不同程度的抑菌作用,与传统的化学防腐剂相 比,这类天然防腐剂物质来源广泛,加工低廉。目前,国内外对于中草药中防腐抑菌成 分的提取、筛选、抑菌性能和抑菌机理进行了大量试验研列。D.Srinivasan〔551等对 印度的50种药用植物的水提物的抑菌状况进行研究,发现其中36种植物具有抗菌活性, 进一步对这些植物的抑菌谱进行实验,发现其中的12种如姜黄、灰杨柳、柚木等具有广 谱的抑菌作用。T.Essawi〔56】等对巴勒斯坦地区的15种药用植物进行研究,发现鼠尾草、 金石蚕、百里香、小茴香等8种草药对革兰氏阴性菌、阳性菌都具有较强的抑菌作用。 香辛料是另一种有开发潜力的天然抑菌资源。丁香、肉豆蔻和胡椒等对多种微 生物有强烈的抑制作用,但大多用在食品方面,香辛料作为天然调味料,不但能够 满足消费者对食品添加剂安全性的要求,而且对于常见污染菌如大肠杆菌、绿脓杆菌都 有较大的杀伤作用。当归、甘椒、薄荷、肉桂等对常见的腐败菌和致病菌也具有一定的 抑制效果。 第一章综述目前,虽然已验证了许多植物的提取物具有抑菌防腐作用,且有不少己作为天然防 腐剂开发利用并投放市场,但大部分都是以粗制品的形式出现,其有效成分到底是何种 物质还不甚清楚,更不用说分离出纯品进行毒理学评价。另外,由于对防腐剂的研究仅 限于宏观的抗菌效果比较及在细胞和亚细胞水平上的显微实验观察,无法定量地确定防 腐剂对菌体细胞的生化作用及其影响因素。所以,到目前为止仍不能对各种防腐剂的分 子结构特征、分子性质参数与抗菌效果进行系统的定性定量分析,并就化妆品天然防腐 剂的设计、筛选、抗菌效果、抗菌机理预测等问题提出有效的解决方法。而且,天然防 腐剂在实际应用中也存在很多问题,如某些天然防腐剂用量少达不到防腐效果,用量多 可能影响化妆品的气味和颜色,并且天然防腐剂普遍存在抗菌谱较窄的缺点等等。以上 这些都是制约天然防腐剂开发利用进程的主要因素。 

3.2檀物抑菌活性物质的提取方法 固液浸提是用溶剂从固体原料中提取有效成分,浸提的原料多数是溶质与不溶性固体组成的体系,所用的溶剂必须具备与所提取得溶质互溶的特性。固液浸提所选用的溶 剂首先要能有选择的溶解提取物质,这样有利于后续的纯化分离;其次,溶剂对溶质的 饱和溶解度要大,这样可以得到高浓度的浸提液,若溶质在所选的溶剂中的溶解度小, 就需要消耗较多的溶剂,在进行溶剂回收时,需要消耗较多的能量;第三需要考虑溶剂 的物理性质,从溶剂回收的角度来看,沸点应该低一些,因为如果在常压下进行操作, 沸点将成为浸取温度的上限,而且粘度和密度对扩散系数、固液分离、搅拌的动力消耗 均有影响。另外,还必需考虑溶剂的价格、毒性、燃烧、爆炸、腐蚀性、对环境的污染 等问题。若提取物应用于医药,化妆品和食品行业,则溶剂的无毒、无色、无味等是至 关重要的方面。 

3.2.2微波提取 微波的快速高温处理可以将细胞内的某些降解有效成分的酶类灭活,从而使有效成 分在药材保存或提取期间不会遭受破坏。从细胞破坏的微观角度看,微波加热导致细胞 内的极性物质,尤其是水分子吸收微波能,产生大量的热量,使细胞内温度迅速上升, 液态水汽化产生的压力将细胞膜和细胞壁冲破,形成微小的孔洞,从而利于生物活性成 分的提取。

 3.2.3超声波提取 利用超声波产生的强烈振动、较高的加速度、强烈的空化效应、搅拌等特殊作用, 可以破坏植物细胞,使溶媒渗透到材料细胞中,促使待提取原料中的化学成分溶于溶媒 中,再通过分离提纯得出所需的化学成分。在国外,超声波法早已应用于生物活性成分 的提取。Veronica.P等从一种海洋沉积物中提取多环芳香烃,用超声波提取30rain比 常规煎煮法提取3h的提取率要高9%。 江南大学硕士学位论文3.2.4酶法提取 将纤维素酶、果胶酶等作用于药用材料,可以使细胞壁及细胞间质中的纤维素、半 纤维素等物质降解,减小细胞壁、细胞间质等传质屏障对有效成分向提取介质扩散的传 质阻力,从而可以有效提高活性成分的提取率。 

4桑叶的资源及其生物活性作用 4.1桑叶的资源 桑叶异名铁扇子。为桑科属(MorusalbaL.)的树叶。叶互生;卵形或椭圆形,长 5-10cm,最长可达20cm,宽5-1Ion,先端锐尖,基部心脏形或不对称,边缘有不整齐 的粗锯齿或圆齿;叶柄长1.5-4cm;托叶披针形,早落。本属植物全球约有16种,分 布于北温带、亚洲热带和非洲热带及美洲地区。我国约有11种,分布于全国大部分地 区,以江苏、浙江等南方养蚕地区产量较大。桑属植物具有降血糖、降血压、抗菌 和抗病毒等多种生物活性。现代药理研究证明桑叶可抑制血糖升高,具有预防和治疗 糖尿病的作用。 

4.2桑叶的化学成分 (1)黄酮及黄酮苷类含有芸香苷、槲皮素、异槲皮苷、槲皮素3.三葡糖苷等化合物删。 (2)甾类成分含有B.谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、B一谷甾醇B.D.葡糖苷、蚊麻脂醇、 内消旋肌醇、昆虫变态激素牛膝甾酮和蜕皮甾酮。 (3)挥发油成分含有乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸、己酸、异己酸、水 杨酸甲酯、愈创木酚、酚、邻苯甲酚、间苯甲酚、丁香油酚等,还含草酸、延胡索酸、 酒石酸、柠檬酸、琥珀酸、棕榈酸、棕榈酸乙酯、三十一烷、羟基香豆精。 (4)糖类含有蔗糖、果糖、葡萄糖脚l。 (5)氨基酸类含有天门冬氨酸和谷氨酸等17种氨基酸。降血压物质Y.氨基丁酸含量 高达226mg/1009,令人注目,而T-氨基丁酸由谷氨酸转化而来,桑叶中谷氨酸高达2323 mg/1009(671。 (6)维生素类含有维生素A、维生素B1、维生素B2、烟酸、维生素C、视黄醇、胡 萝b素及食物纤维等f64661。 (7)微量元素含有锌、铜、硼、锰、铁等多种微量元素咿’66〕。 (8)生物碱成分。 

4.3桑叶的应用现状 4.3.1医药应用 桑叶的药用首载于《神农本草经》,桑叶性味苦甘、寒,甘所以益血,寒所以凉血。 第一章综述甘寒相合,故下气而益阴,又能止咳,有补气之功,是中医清热解毒之要药。主治热感冒、 肺热燥咳、头晕头疼、目赤等症1651,临床应用十分广泛,常用桑叶入药,组成复方中药。 疗效良好。桑全身是宝,桑叶、桑根、桑白皮、桑枝、桑皮汁、桑叶汁、桑椹均为药用 抗应激、抗衰老的功能:桑叶中含有的SOD、黄酮化合物具有清除自由基,增强机体抵抗力和抗衰老的作用。桑叶中丰富的VBl有利于维持神经、心脏及消化系统正常 机能,可治疗多发性神经炎、心脏活动失调、胃机能障碍;VB2有利于维持视网膜正常 机能,能治疗角膜炎、唇损伤、脂溢性皮炎等;vc能增强微血管的致密性,增加机体 对感染的抵抗力。桑叶中含有较多的叶酸,它参与核酸的合成,有抗各种贫血和促进 生长的作用,并能治疗胃癌、肠胃管道障碍、食欲营养不良和疮疹性皮炎等,对人体 健康意义重大。桑叶中含有的琥珀酸可使细胞活力正常化,不仅可以修复机体的损坏, 还有活化细胞的功能。 据研究,桑叶能提高小鼠对高温刺激的耐受能力和防止由于应激刺激引起的大鼠 肾上腺皮质分泌功能低下,而当肾上腺功能低下时,桑叶可使之恢复正常。桑叶能延 长小鼠游泳及转棒时间,具有增强肌体耐力作用。桑叶能延长果蝇的寿命,能提高老 年大鼠红细胞内SOD含量,从而能有效地清除生物氧化产生的超氧阴离子,并能降低 老年大鼠大脑、脊髓组织脂褐质含量,表明具有延缓衰老作用。 降血糖的作用嘲】:桑叶能降血糖主要是因为桑叶中含有一种独有的生物碱.I.脱氧 野尻酶素(DNJ),DNJ是Y一种a.糖苷酶抑制剂,能阻碍a.糖苷酶50%的活性,DNJ能同 小肠中的麦芽糖酶、蔗糖酶和乳糖等a.糖苷酶结合,且其之间亲合力大于蔗糖与麦芽糖 等二糖与a.糖苷酶的亲合力,于是大量的二糖不能进一步被吸收分解,从而降低血糖值。 要从根本上治疗糖尿病,需要重新激活机体内胰岛素的分泌。桑叶可促进胰岛素B细胞 分泌胰岛素,并降低胰岛素分解速度,从而有利于糖尿病治疗。据研究,糖尿病患者 体内血糖升高与自由基升高密切相关。桑叶中的黄酮类化合物不仅可以清除体内自由 基,还可清除酶类所不能清除的自由基,清除效果甚至强于抗坏血酸。 降血压、降血脂、减肥以及预防心肌梗塞和脑溢血的作用:桑叶中的生物碱可参 与糖脂代谢,有利于降血压、血脂。桑叶中的蜕皮激素能促进细胞生长,能促进人体 蛋白质合成,排出体内胆固醇,降低血脂。桑叶中丰富的槲皮素等黄酮类化合物属生 理活性物质,不仅可使血管收缩,使冠状血管扩张,改善心肌循环,还具有抑制脂质 氧化,抑制胆固醇的吸收,有降血压、防动脉硬化之功能。桑叶中丰富的GABA,是神 经传递介质,并具有降血压和抗动脉硬化的作用。 桑叶茶可以减肥与桑叶消肿、清血的作用有关。桑叶茶之所以能够消肿,是因为 桑叶有利水的作用。清血是指将血液中过剩的中性脂肪和胆固醇排清,桑叶中的生物 碱、蜕皮激素等功能性成分具有清血作用。桑叶中含有强化毛细血管、降低血液粘度 的黄酮类成分,所以在改善高脂血症与减肥的同时,又有预防心肌梗塞和脑溢血的作 江南大学硕士学位论文调整肠道功能与利尿防便秘功能:桑叶能行气,改善肠功能。桑叶中含有大量的 有机成分,如草酸、酒石酸、琥珀酸、棕榈酸等;另外在小肠未吸收而转入的糖类, 由于大肠内菌丛的作用引起发酵,产生CO和H2并生成丁酸、丙酸、乳酸和乙酸等有机 酸。这些有机酸可使肠道内容物酸度增大,能抑制有害细菌的增殖。加上桑叶中所含 的DNJ、矿物质和食物纤维等成分的综合作用,可使腹鸣、放屁、腹胀、粪便和便秘等 症状大为改善,同时也能增加体内水分的排出。 抗癌作用:桑叶中的维生素具有抑制变原效应,桑叶中的SOD具有抗癌活性,桑 叶中的黄酮类化合物也有防癌的功能,桑叶内的桑素(Mulberin)具有抗癌活性,并有抑 制真菌的作用。 桑叶防治少白头:近年研究证明,“少白头”与体内酪氨酸酶不足有着密切的关系, 而铜则是合成酪氨酸酶的重要原料。桑叶中铜含量丰富,每l克桑叶中约含铜 1.02.2.22ug。所以,用桑叶防治“少白头”有较好的效果。取霜桑叶或鲜桑叶5009,除去 梗茎,研末;另取黑芝麻2509,炒熟研末。二者加白糖调匀或制成大蜜丸,每日早晚 各服209,白天桑叶茶水送下。长期服用,可使白发转黑。 

4.3.2食品应用 桑叶含有17种氨基酸、多种生命必需的微量元素、维生素及食物纤维等功能性物 质,是一种天然、价廉物美的新型功能性食品的原剃6”。可以开发桑茶、桑露、桑汁、 桑晶等系列食品。桑叶资源要注重综合开发利用,产品开发应由粗加工向提取、精制、 深加工转化,以提高经济效益。 桑茶粗蛋白中含有17种氨基酸,其中15种为人体所必需,营养丰富。桑茶略加咖啡 碱,还能治伤风、失眠、头痛、高血压等。 色素桑叶经酒精抽提、浓缩、碱化,得绿色色素,可用于化妆品和食品着色。 水提、醇提和微波醇提的桑叶提取物均有较强抗氧化作用,且这种抗氧化作用强 弱与提取物中总黄酮含量有一定正相关性。 

4.3.3化妆品应用 消疮祛斑作用:近年来的研究证明,桑叶有良好的皮肤美容作用,特别是对脸部的 痤疮、褐色斑有比较好的疗效。由于桑叶有清热解毒的功效,可用桑叶来治疗面部褐色 根据药理研究证明,桑叶富含黄酮化合物、酚类、氨基酸、有机酸、胡萝b素、维生素及多种人体必需的微量元素,这对改善和调节皮肤组织的新陈代谢,特别是抑制色 素沉着的发生和发展均有积极作用。另外,坚持常饮还有减少皮肤或内脏中脂褐质(即 老年斑)的积滞。 桑叶茶的止汗作用:桑叶治汗出,由来已久。秦汉时期的《神农本革经》中记载: “桑叶除寒热、出汗”。被称为金元四大家之一的名医朱震亨(朱丹溪)在《丹溪心法》一 书中记载:“经霜桑叶研末,米饮服,止盗汗”。明末清初的名医傅青主,很擅长用桑叶 lO 第一章综述 止汗,他拟定有止汗神丹、遏汗丸、止汗定神丹等几个药方,都选用桑叶为主药,并称 赞桑叶为“收汗之妙品”。 用桑叶沐浴对美容大有裨益。研究表明经过霜雪洗礼的桑叶,解表且不伤里,性 凉且滋润,护肤而不脱脂。是很好的美容浴方,对皮肤粗糙的人是最佳选择,经常沐 浴可以使皮肤变得光洁细嫩。 5结论和立题依据 近年来,从植物中寻找和提取功能性物质,成为当前化妆品研究的热点。“组分天 然化”、“回归大自然”的呼声成为世界化妆品工业的潮流。随着我国加入WTO,国产化 妆品与国外化妆品的竞争日益加剧,天然活性化妆品特别是中草药化妆品是我国化妆 品取胜的法宝。而从销售额和人均消费水平看,我国的天然化妆品有很大的发展空间 和潜力。 本人在定题之前研究比较了多种天然植物提取物的抑菌效果,比如竹叶、银杏叶、 芭蕉叶、芦苇叶、桑叶等,结果显示桑叶的抑菌效果比较明显,而且桑叶具有美白保 湿功效,作为化妆品的功能性添加剂很有开发利用的价值,所以最后选定研究桑叶的 抑菌活性。 纵观前人关于桑叶提取物的抑菌作用的研究进展,发现存在以下几个问题: (1)对桑叶提取物的抑菌效果仅用抑菌圈定性讨论,没有精确测定最低抑菌浓度的报 (2)对桑叶抗菌作用的物质基础的研究未见详细的报道。(3)对桑叶抑菌活性物质的最佳提取工艺和进一步分离纯化条件没有深入研究。 (4)桑叶提取物在化妆品中的应用未见详细的报道。 基于以上问题,本试验选取无锡中药材店的干桑叶为原料,通过D值计算法快速、 精确的得出桑叶提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度;对于活性物的 提取得出了最佳的工艺条件,同时在抑菌活性的跟踪下,进一步分离鉴定桑叶中的主 要抑菌活性成分。把桑叶提取物应用到化妆品中,对于它的防腐效果,美白保湿效果, 膏霜的稳定性作了研究,为桑叶资源在化妆品中的开发利用提供理论依据和技术支持。 江南大学硕士学位论文 第二章桑叶提取物的抑菌效果及最低抑菌浓度的研究 桑叶提取物具有抑菌效果,本试验采用了扩散法和线性回归法验证了它的抑菌效 果,并采用D值计算法快速、准确地得出它对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓 1.1试剂与仪器第一节桑叶提取物的抑菌效果评价 超净工作台 上海仪器厂 SPX.250型生化培养箱 上海跃进医疗器械厂 手提高压蒸汽灭菌锅 无锡第二医疗器械厂 精益移液器 无锡市医疗器械厂 数显电子天平 上海天平仪器厂 HH.2型数显恒温水浴锅 江苏金坛荣华仪器制造有限公司 热风干燥箱 上海实验仪器总厂 lo-201型旋转蒸发仪 上海申顺生物科技有限公司 JFSD.100粉碎机 上海嘉定粮油仪器有限公司 索氏提取器(配套) 江南大学设备处 干桑叶 无锡药材店 桑叶水提取物 自制 桑叶醇提取物 自制 极美复合物 昆山市华新日用化学品有限公司 乙醇为分析纯,实验用水为去离子水。 极美复合物是双咪唑烷基脲和碘丙炔基氨基甲酸丁酯的混和物。